Последние новости

Реклама

В.В СКЛЯРЕВИЧ. Антибактериальные лекарственые средства. Методы стандартизации препаратов. Раздел 3

В.В СКЛЯРЕВИЧ. Антибактериальные лекарственые средства. Методы стандартизации препаратов. Страница 307

Для определения концентрации антибиотика микробиологическим методом вначале необходимо подготовить исследуемый материал для проведения анализа.

Если в качестве биологической пробы берется кровь, то после образования сгустка ее центрифугируют в течение 15 мин со скоростью 2500-3000 об/мин и сыворотку отделяют. В дальнейшей работе используют полученную сыворотку.

Если в качестве биологической пробы берется ткань, то ее готовят к работе в соответствии со следующими требованиями:

I — определяют массу образца;

II — при определении концентрации антибиотиков в жировой ткани, необходимо ее образцы на 24 ч залить стерильным изотоническим раствором натрия хлорида в объеме, равном массе данного образца, для определения концентрации используется получаемая вытяжка;

III — при определении концентрации антибиотиков в мышечной ткани к образцу добавляют раствор фосфатного буфера (рН = 7.0) и 25 % раствора трихлоруксусной кислоты в объемах, равных полученной массе образца, и гомогенизируют [2]. Кроме данного метода, для гомогенизирования полученного образца можно использовать метод его растирания с кварцевым песком с добавлением раствора фосфатного буфера (рН = 7.0) [1]. Далее полученный гомогенат центрифугируют в течение 15 мин при скорости в 3000-5000 об/мин. Для определения концентрации используется надосадочная жидкость [3].

После соответствующей подготовки образцов приступают к приготовлению плотной питательной среды. Для этого используют или двухслойный агар, или однослойный питательный агар, разлитый в стерильные чашки Петри диаметром 100 мм, расположенные на горизонтальной поверхности. Для нижнего слоя, как правило, используют 15 мл «голодного» незасеянного агара, для верхнего или одного слоя —5-15 мл питательного агара (пропись зависит от группы антибиотика), предварительно зараженного тест-микробом, в соответствии с температурой, группой антибиотика и посевной дозой.