Последние новости

Реклама

В.В СКЛЯРЕВИЧ. Антибактериальные лекарственые средства. Методы стандартизации препаратов. Раздел 3

В.В СКЛЯРЕВИЧ. Антибактериальные лекарственые средства. Методы стандартизации препаратов. Страница 304

8.4.1. Амоксициллин

Метод: ВЭЖХ с флюориметрическим детектором.

Подготовка проб: к 500 мкл плазмы крови добавляют 4 мл воды и 3 мл 10 % трихлоруксусной кислоты и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. К 3 мл супернатанта добавляют 0.5 мл 2 М NaOH и оставляют на 5 мин, затем добавляют 0.5 мл 2 М НС1 и 2 мл 0.002 % раствора хлорида ртути (II) в 0.5 М Na2HP04 (рН 6.0), нагревают при 50 °С в течение 25 ми- н, добавляют 6 мл этилацетата, энергично встряхивают в течение 5 мин и центрифугируют. 5 мл органического слоя упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола. Аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографирования: колонка — 250 х 4 мкм Nu- cleosil С18; подвижная фаза — метанол:вода (55:45); скорость элюирования — 1 мл/мин; температура колонки — 55 °С; флюориметрический детектор — А,ех = 355 нм, А,ет = 435 нм.

8.4.2. Цефаклор

Метод: ВЭЖХ с УФ-детектором.

Подготовка проб: к 100 мкл сыворотки крови добавляют 10 мкл раствора 100 мкг/мл цефрадина в воде и 100 мкл аце- тонитрила, встряхивают на vortex 1 мин и центрифугируют при 9000 об/мин — 10 мин. Отбирают 100 мкл супернатанта, упаривают при комнатной температуре, растворяют в 100 мкл 20 mM NaH2P04 (рН 3.5) и центрифугируют при 9000 об/мин — 5 мин. Аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.

Условия хроматографирования: колонка — 200 х 4.6 mm 5 pm Nucleosil С18; подвижная фаза — ацетонитрил:буфер в соотношении 30:70, доведенная NaOH до рН 7.0 (буфер — 20 шМ фосфат натрия и 5 шМ тетрабутиламмония сульфат); скорость элюирования — 1 мл/мин; УФ-детектор — Х = 265 нм.

8.4.3. Ципрофлоксацин, ломефлоксацин, офлоксацин

Метод: ВЭЖХ с флюориметрическим детектором.

Подготовка проб: к 200 мкл сыворотки крови добавляют 50 мкл раствора 40 мкг/мл хинина гемисульфата в воде, встряхивают 30 с, добавляют 400 мкл ацетонитрила, встряхивают на vortex 1 мин и центрифугируют при 4000 об/мин — 10 мин. Отбирают органический слой и упаривают до 200 мкл под током азота при температуре 45 °С. Аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.